Tsukuyomi ist ein Mangekyō-Sharingan-Dōjutsu, eines der stärksten Genjutsu. Nach Blickkontakt mit dem Ziel zieht Itachi Uchiha es in eine Illusion seiner eigenen Vorstellung. Dank der Fähigkeit, die Zeitwahrnehmung zu verzerren, lässt er das Opfer in wenigen Sekunden Tage ununterbrochener Folter erleben: endlose Schläge, sich wiederholende Albträume, Verletzungen aus der Vergangenheit. Die Welt innerhalb der Illusion sieht oft wie ein Negativ mit grauen Tönen aus und kann durch einen roten Mond am roten Himmel ergänzt werden.
Wegen der Stärke des Mangekyō und der augenblicklichen Geschwindigkeit der Wirkung sind gewöhnliche Methoden zur Aufhebung von Genjutsu gegen Tsukuyomi nutzlos. Nach dem Ende der Illusion fällt das Opfer gewöhnlich ins Koma. Träger des Sharingan können das Bewusstsein kurzzeitig aufrechterhalten, aber nur ein sehr erfahrener Sharingan-Träger kann sich befreien. Die Anwendung der Technik erfordert eine enorme Menge an Chakra und belastet die Augen stark, weshalb Itachi nach der Anwendung den Kampf nicht fortsetzen kann und seine Sehkraft sich verschlechtert. Die Einzige, die den psychologischen Schaden von Tsukuyomi heilen kann, ist Tsunade.
